エムエステクノシステムズ｜NucleoCounterを利用した正確な細胞カウント

NucleoCounterを利用した正確な細胞カウント NucleoCounting

▼対応機種
　　　　　　

NC-200

NC-202

NC-250

NC-3000

NucleoCounter^®は、塊や凝集体の細胞をカウントするための信頼性の高いソリューションを提供します。蛍光色素を使用して細胞核を染色し、ソフトウェアによって凝集体中の細胞核を1つずつセグメント化します。

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細胞数および生存率測定の概要

NucleoCounter^®シリーズでは、細胞を簡単にカウントし、その生存率を測定することができます。NucleoCounter^®は、哺乳類の初代細胞、細胞株、白血球、CHO細胞、MSC、iPSC、PBMC、肝細胞、T細胞、NK細胞、CEF、昆虫細胞、酵母、全血、間質血管細胞群（SCF)、マイクロキャリア、スフェロイド、凝集細胞など、特殊な細胞種やさまざまな培養条件のニーズに対応した幅広いプロトコルを提供します。

NucleoCounter^®は、蛍光顕微鏡と画像解析を用いて、細胞の定量化と生存率の分析を自動化します。明視野顕微鏡とは異なり、アクリジンオレンジ（AO）やDAPIで染色した細胞を可視化し、定量化することで、全細胞と死細胞を識別することが可能であるため、より高い精度が得られます。

原理

細胞の検出には蛍光色素のアクリジンオレンジ（AO）を、死細胞の検出には核酸染色剤のDAPIを使用しています。AOは細胞膜を透過する色素で、主に核酸、つまりサンプル中のすべての細胞を染色します。DAPIは細胞膜を透過しないため、細胞膜が透過している細胞、すなわち死細胞のみを染色することができます。

これらの色素はカセットに封入されており、サンプル分取、染色、NucleoCounter^®装置へのロードの際にユーザーの干渉を防ぎます。

◇アッセイ結果（下図）画像をクリックすると拡大します。

従来法との違い

◆光学顕微鏡は、陰影によって対象物の輪郭を強調します（図1）。従来の光学顕微鏡法を使用して細胞を数えると、視覚的に細胞と区別できない混入物や細胞デブリが含まれることがあります。さらに、細胞塊の場合のように隣接する細胞の外側の輪郭が重なる場合、個々の細胞を正確に識別することは非常に困難です。

◆NucleoCounterは、アクリジンオレンジ(AO)とDAPIを利用して、細胞核を特異的に標識し、ハイコントラストのシグナルを生成します。核は細胞全体よりも小さいため、細胞が小さな凝集体を形成する場合にセグメント化するのに適しています（図1）。さらに、光学顕微鏡下で見えるデブリ等は、蛍光顕微鏡下では検出されません。

図１：凝集した細胞を対象とした光学顕微鏡（左）と蛍光顕微鏡（右）の視野
蛍光を使用する場合、光学顕微鏡で見えるアーティファクトは見えません。またアクリジンオレンジ（核染色）で蛍光を発する細胞核は、細胞全体よりも小さい輪郭を示し、凝集体中の個々の細胞をよりよく識別できます。

NucleoView™ソフトウェアによる正確なカウント

Nucleoview™は、NucleoCounterシステムのソフトウェアです。強力なアルゴリズムを使用して、より小さな集合体内の個々の細胞を正確に識別および分析します。シグナル強度ピークと対応するシグナル勾配は、バックグラウンドレベルに対してオブジェクトをセグメント化するために使用されます。細胞が近接しておりシグナルが重複している場合でも、識別可能な個別のピークを示します（図2）。

図2：NucleoView™ソフトウェアによる自動画像解析シグナルピークと対応する勾配は、個々の細胞をセグメント化するために使用されます。データはユーザーが簡単に処理できるようにプロットに変換されます。

NucleoCounterは、細胞凝集塊の存在割合を数値パラメーターで提供します。

凝集度合いが強いサンプルの場合でも、専用のAggregated Cells Assayを使用することで、正確なカウントを行えます。オペレーターは、Aggregated Cells Assayを選択するかどうかについて十分な情報に基づいた決定を下すために、サンプル中の凝集塊の存在割合を確認できます。

操作手順

カセット使用の場合 (NC-200, NC-202)

NC-202の場合はVia-2カセット

NCスライドを使用の場合 (NC-250・NC-3000）

NucleoCounter®シリーズでカウント可能な細胞種と培養条件

以下のような特殊な細胞タイプや培養条件でも、NucleoCounterで細胞カウントを行うことが可能です。

白血球	昆虫細胞
CHO細胞	酵母
間葉系幹細胞（MSCs）	全血（WBC)
iPSCs	間質性血管分画
末梢血単核細胞（PBMC）	マイクロキャリア
肝細胞	スフェロイド
凝集細胞	T細胞

GMPコンプライアンスを容易に

Chemometecのプロトコルは、細胞計数プロセスから変動や主観を排除し、誰が測定しても正確で一貫性のある結果得ることが可能です。
さらに、シンプルなワークフローは理解しやすいSOPに最適です。
その結果、GMP遵守のための細胞計数法のバリデーションはシンプルで管理しやすいものとなります。NucleoCounter® NC-200™, NC-202™, NC-250™, およびNC-3000™装置は、Annex-11および21 CFR Part 11にも対応^＊しています。
＊オプションのライセンスが必要です。

消耗品

品番	品名	容量	用途
942-0001	NC‐Slide A2	25枚	全アッセイ共通(NC-250・NC-3000）
942-0003	NC‐Slide A8	25枚	全アッセイ共通(NC-250・NC-3000）
941-0012	Via1-Cassette™	100個/箱	生存率・細胞数測定 (NC-200・NC-3000）
941-0024	Via2-Cassette™	100個/箱	生存率・細胞数測定　(NC-202)
910-3018	Solution 18	1ｍL(200回分)	生存率・細胞数測定