エムエステクノシステムズ｜CAR-T細胞療法におけるセルカウント

CAR-T細胞療法におけるセルカウント Cell counting in CAR T cell therapy

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NucleoCounter® は、堅牢で正確な細胞カウントと生存率を必要とする FDA 承認 CAR-T製品製造の現場で採用されています。

はじめに- 細胞ベースの免疫療法

細胞ベースの免疫療法は、免疫細胞を患者に注入する幅広い治療法をカバーしています。これらの治療法は、さまざまな種類の癌や自己免疫疾患の治療法としてよく知られています。たとえば、キメラ抗原受容体 T 細胞 (CAR-T) は現在、さまざまな適応について臨床試験で評価されています。

CAR-NK 細胞は、移植片対宿主病 (GvHD) の心配がないため、CAR-T 療法の代替として有望視されています。CAR-NK 細胞は、がんの適応症に対する標準的な同種治療になる可能性があります。

他の細胞免疫療法としては、TIL(Tumor Infiltrating Lymphocyte)治療法の研究も活発です。

CAR-T細胞の製造を改善する

キメラ抗原受容体T(CAR-T)細胞の作製は、白血球アフェレーシス、T細胞の活性化、遺伝子組み換え、増殖、製品の製剤化を含む複雑なプロセスです。
このプロセスでは、製品化されたCAR-T細胞製品の安全性と有効性を確保するために、厳格な品質管理(QC)対策が不可欠です。
CAR-T細胞製造におけるQCの重要な要素は、細胞カウントです。生産のさまざまな段階で生存細胞の数を決定し、最終製品の処方量それぞれに、治療に効果的な活性あるCAR-T細胞が必要数含まれていることを確認することが不可欠です。

開発と製造のための一貫した細胞数と生存率測定のために

課題として挙げられるもの

細胞ベースの免疫療法においては、細胞自体が医薬品または薬剤です。このような製品では、製造プロセスを考慮することが重要です。
細胞免疫療法では患者に投与される前に、分化プロセスが必要な場合があり、標準化された一貫性のある製品を製造するには、分化前と分化後の細胞数をカウントすることが重要です。また、細胞数に加えて生存率も重要です。細胞の投与量は生存細胞数によって決まるためです。

NucleoCounter® がもたらすもの

NucleoCounter® NC-202™およびNucleoCounter® NC-200™は、細胞ベースの免疫療法分野をリードする企業によってゴールドスタンダードとして採用されています。FDA 承認の CAR-T 療法のいくつかでは、製造と品質管理、そして多くの場合、研究と製品開発の上流プロセスで NucleoCounter® を使用しています。堅牢で正確な細胞カウントと生存率データを提供することができるため、本製品が第一の選択肢となっています。 NucleoCounter®を使用すると、アフェレーシスから精製、増殖、そして最終的にCAR-T 細胞調製までの全プロセスを簡単にモニタリングできます。同じセルカウンターを使用することで、一貫性があり、正確で信頼性の高い結果が得られます。

正確さを支える原理

あらゆる細胞サンプルに対応

NucleoCounterは様々な種類の細胞種を扱えます。装置設定を最適化する必要はありません。本装置は、細胞サイズ、形態、培地の種類に関係なく、また赤血球、磁気ビーズ、細胞デブリが存在する場合でも、堅牢で精確なデータを提供します。

この結果、複雑な製造プロセスであっても、バリデーションが容易です。

【サンプルの例】
・全血サンプル・iPS
・Leukopak ・MSC
・PBMC ・腫瘍浸潤リンパ球(TIL)
・凝集した細胞・樹状細胞

精度を支えるテクノロジー

NucleoCounter® NC-202™/NC-200™ は、他の自動細胞カウンターや手動カウントを含むすべてのカウント方法の中で最高レベルの精度を実現します。この精度の秘密は、サンプル/試薬の混合とピペッティングの必要性を排除することでユーザーエラーを最小限に抑えるVia2/Via1-Cassette™にあります。

さらに、細胞濃度の正確な計算を確実にするために、各カセットは個別に容量校正されています。可能な限り正確なカウントを確実に得るために、各機器はマスター機器に合わせて校正されているため、再度校正する必要はありません。これにより、技術移転が容易になり、検証の必要性が少なくなります。

カセットテクノロジー

重要なポイント

・最小限のばらつき :当社の機器は、独自の校正方法と自動サンプル処理により、市場で最高レベルの精度をもちます。

・スピード :「Run」を押してから 30 秒以内（NC-202の場合）に、結果を表示およびエクスポートできるようになります。

・客観的な細胞数 : AO および DAPIを使用した蛍光顕微鏡解析は、細胞生存率を判定する客観的な手段を提供します。

セキュリティと整合性

NC-202™ /NC-200™はソフトウェアと連携して動作し、細胞製造ワークフロー全体にわたって細胞を客観的かつ正確に分析します。NucleoCounterのソフトウェアは、制限モードで使用時のデータの整合性とセキュリティを確保するために、あらゆる cGMP セットアップに統合できます。

・21 CFR Part 11 対応: NucleoCounterのソフトウェアは cGMP 設定で動作し、21 CFR Part 11 に準拠しています。
・監査証跡: NucleoCounterのソフトウェアはソフトウェア内のすべてのアクションを追跡し、表示およびエクスポートできます。
・制御されたアクセス: 定義されたユーザーグループによって、さまざまなレベルのアクセスが提供されます。データの取得中または保存後に、ユーザーはデータを変更できません。

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よくある質問とその答え

NC-202™/NC-200™ が CAR T 細胞療法ワークフローにおける主要な選択肢となる理由は何ですか?

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「プロセスが製品である」という考えが細胞および遺伝子治療において依然として主流となっているのは、これらの医薬品の出発原料が変動性があるためです。このため、プロセスの変動性を最小限に抑えることは、スケーラブルな製造プロセスを構築するときに克服すべき主要な課題の 1 つです。

製造後も、治療薬の投与量を正確にするために、正確な細胞カウントが必要です。たとえば、凍結保存後、NC-202™/NC-200™ は生存細胞数を決定するためによく使用されます。これらのすべてのステップを通じて、細胞数と細胞生存率を明確に理解することで、製品に対する理解が深まります。
ただし、細胞数が大きく変動すると、重要なプロセスパラメータを制御することが難しくなります。

NC-202™/NC-200™ は、自家および同種細胞治療の製造と提供のワークフロー全体をどのようにサポートしますか?

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細胞および遺伝子治療のワークフロー全体にわたって、多くの分析機器が必要です。細胞カウントは、細胞採取の最初から提供に至るまでの重要なステップです。自家細胞治療の場合、NC-202 はアフェレーシスから製品のリリースまで細胞をカウントするために使用されます。
NC-202™/NC-200™ のような堅牢な細胞カウンターは、さまざまな哺乳類細胞をカウントし、破片や凝集細胞を含む扱いにくい細胞サンプルも処理できます。

NC-202™/NC-200™ はどのようにして、さまざまな機器、ユーザー、拠点にわたって一貫した結果を保証するのでしょうか?

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使いやすさ、事前校正、精密技術により、複数のサンプルを採取して NC-202™/NC-200™ で測定すると、非常に低い変動が得られます。この結果は、さまざまなユーザーや研究拠点で再現できます。

分析機器が時間の経過とともに変化する理由は多数あります。温度、湿度、校正の問題、移設、その他の要因が機器のパフォーマンスに影響を与える可能性があります。
NC-202™/NC-200™ はフローシステムを使用しません。使い捨てカセットを選択すると、装置自体は細胞カウントのみを実行します。細胞をサンプリングして染色するには、Via2/Via1-Cassette™ が必要です。このカセットは、オペレーターがカセットのピストンを押し下げると、これらの機能を同時に実行します。

蛍光試薬のAOとDAPI を使用することで、ソフトウェアによって生細胞と死細胞を明確に表示し、手動での細胞カウントのようにヒトの判断が介入しません。
当社のすべての機器は、デンマークの本社に保管されている 1 つスタンダード機器に出荷前に事前校正されています。