NucleoCounterによるCell Vitalityアッセイの特徴

◆ 細胞の健康状態や酸化ストレスを簡単に評価できるアッセイです
◆ 酸化ストレス（レドックス状態）を直接検出します
◆ アッセイに要する時間は1分未満
◆ シングルセルレベルでの画像取得と解析がワンステップで可能
◆ ユーザーフレンドリーなプロトコール
◆ プロットマネージャー機能によるわかりやすいデータ表示
◆ 自動化されたPDFレポート
◆ FCS/ACSフォーマットでのデータエクスポート

Cell Vitalityアッセイの概要

cell vitalityアッセイは、グルタチオン（GSH）などの還元型チオールレベルを簡単に測定する方法を提供します。GSHは、フリーラジカルのクエンチング、薬物の解毒、細胞シグナル伝達、細胞増殖など多くの細胞プロセスに関与しています。

GSHは動物細胞に最も多く存在する低分子チオールです。還元状態ではGSHとして、酸化状態ではグルタチオンジスルフィド（GSSG、すなわち2つのGSH分子がジスルフィドブリッジで結合したもの）として存在します。

健康な細胞では、全グルタチオンの90％以上がGSHの状態にありますが、癌、嚢胞性線維症、糖尿病、HIV、神経変性疾患、老化などの疾患状態では、GSHプールが枯渇し、細胞の酸化ストレスにつながります。酸化ストレスは、アポトーシスの初期指標になります。アポトーシスの間、GSHのレベルは減少し、VitaBright-48™蛍光色素を使用して検出することができます。

アッセイの原理- VitaBright-48™とは

VitaBright-48™ は、還元型チオール（GSH）と結合したときのみ蛍光を発する特許取得済みの蛍光色素です。VitaBright-48™ は、細胞サンプルに導入されると直ちにチオールと反応し、蛍光を発します。この蛍光強度を定量化することで、細胞内のチオールレベルを把握することができ、細胞の健康状態を判断することが可能です。

測定後は、細胞集団のチオールレベル分布を示す散布図とヒストグラムが、VitaBright-48™の強度として自動的に表示されます。処理細胞と対照細胞のVitaBright-48™強度を比較することで、アポトーシス細胞やストレス細胞など、細胞活性の低い細胞の割合を知ることができます。

プロットマネージャーに表示される結果

Hybridoma細胞は、一般的な化学療法剤であるエトポシドの非存在下（上段）または存在下（下段）で培養した。細胞はVitaBright-48™、Acridine Orange（AO）、Propidium Iodide（PI）で染色し、Vitality Assay（NucleoCounter^® NC-3000™）を用いて解析しました。

散布図とヒストグラムは、NucleoView™ NC-3000™ ソフトウェアを使用して取得しました。プロット中のポリゴンやマーカーは、さまざまな細胞集団を区分けするために表示されています。この例では、エトポシドは、ある部分集団（VitaBright-48™シグナルが低い細胞）においてチオールのレベルの大幅な減少を引き起こし、その存在が細胞の活性を大きく低下させることを意味しています。

消耗品

品番	品名	容量	用途
942-0001	NC‐Slide A2	25枚	全アッセイ共通(NC-250・NC-3000）
942-0003	NC‐Slide A8	25枚	全アッセイ共通(NC-250・NC-3000）
910-3005	Solution 5	1ｍL	Cell Vaitalityアッセイ（NC-3000用）
910-3006	Solution 6	1ｍL	Cell Vaitalityアッセイ (NC-250用）

アプリケーションノート