NucleoCounterによる細胞周期解析の特徴

◆ 細胞周期のフェースを迅速かつ簡単に測定
◆ シングルステップでデータ取得、解析、結果表示
◆ 異なるユーザー間でも標準化された結果が得られます
◆ RNase処理不要
◆ キャリブレーション不要
◆ FCS/ACS フォーマットでのデータエクスポート

NucleoCounterで利用可能な２つのアッセイ

細胞周期と細胞分裂は、真核細胞における最も基本的で重要なプロセスです。
NucleoCounterによる細胞周期アッセイでは、個々の細胞周期段階を表す DAPI 蛍光強度が定量化され、使いやすいインターフェースに表示されます。

【1】2-step cell cycleアッセイ

トリプシン処理、洗浄、遠心分離を使用しない 2 つの簡単なステップで、細胞集団の分離、透過処理、凝集除去、均一染色を容易にします。

【2】Fixed Cells Assay

固定細胞アッセイの細胞周期は、数週間の細胞保存を可能にします。このアッセイではエタノール固定後、サンプル解析前に細胞を冷蔵保存することができます。

アッセイ原理

細胞周期アッセイでは、核染色試薬であるDAPIを使用して DNA含有量を測定します。DAPIは、二本鎖 DNAに特異的に結合します。したがって、DNA含有量測定の前にRNAを除去する必要はありません。
蛍光顕微鏡と画像解析を使用して、DNA含有量の定量化と細胞周期の測定が自動化されます。



サンプルは、NucleoCounter^® NC-3000™ サイトメーターを使用して解析され、細胞の蛍光が DNA 含有量の定量化を表示するヒストグラムに定量化されます。表示されたヒストグラムのマーカー、M1 ～ M4 を使用して、サブ G1 期、G0/G1 期、S 期、G2/M 期のさまざまな細胞周期段階の細胞を識別できます。

プロットマネージャーに表示される結果

ヒストグラム プロットは、エトポシドの非存在下 (上段) または存在下 (下段) で増殖した U2OS細胞を示しています。
NC-3000™の 2ステップ セル サイクル アッセイを使用して、DNA含有量を測定し、NucleoView™ソフトウェアによって散布図、ヒストグラム、表を取得しています。
ヒストグラムのマーカーは、異なる細胞周期段階の細胞を区別するために使用されました。色付きのヒストグラムは、未処理 (青線) とエトポシド処理 (赤線) のサンプルのマージです。G0/G1 は M1マーカーで示され、S期は M2で示され、G2/M期の細胞は M3で示されます。



プロットマネージャーおよびNC-3000ソフトウェアについて

消耗品

品番	品名	容量	用途
942-0001	NC‐Slide A2	25枚	全アッセイ共通(NC-250・NC-3000）
942-0003	NC‐Slide A8	25枚	全アッセイ共通(NC-250・NC-3000）
910-3010	Solution 10	100ｍL	2-Step Cell Cycleアッセイ 生存率・細胞数測定（凝集細胞）
910-3011	Solution 11	100ｍL	2-Step Cell Cycleアッセイ
910-3012	Solution 12	1ｍL	2-Step Cell Cycleアッセイ 生存率・細胞数測定（凝集細胞）

アプリケーションノート