C.T.L.社はELISPOTアッセイのパイオニア的存在で、世界で初めて今日の免疫モニタリング手法として耐えうるアッセイ法を確立し(Science, 1996, 271:1728-30)、科学的に正当性を立証されたT細胞診断ツールとしてELISPOTアッセイ利用の基礎を紹介しています(J. Immunol., 2002, 168:545-53)。
このC.T.L.社の豊富な知見に基づいたImmunoSpotキットは唯一、ELISPOTアッセイに必要なプレート、アッセイ培地、検出抗体、発色試薬まで揃うALL-in-Oneのキットです
CTL社のELISPOT、FluoroSpotキットをご購入いただいたお客様で、アナライザーがご利用いただけない場合に、弊社でプレートをスキャンし結果をお返しする解析受託サービスをご提供しております。
ELISPOTアッセイは、細胞を取り巻く直近の細胞環境で 刺激されたT細胞から放出されたサイトカイン(またはB細胞 ELISPOTの抗体)を検出します。 T細胞は、アッセイ中に キャプチャー用抗体でコーティングされた膜上で培養され、 抗原またはポリクローナルマイトジェンを介して刺激すると、 T細胞はサイトカインを放出し、その時点でサイトカインはキャプチャー抗体に結合します。したがってELISPOTアッセイは、サイトカインが培地で希釈されてしまう、または分解されてしまう恐れのあるELISAやサイトカインビーズアレイ(CBA)などの間接的なアッセイよりもはるかに高い感度で、放出されたサイトカインを測定できます。
vs フローサイトメトリー/ICS(細胞内サイトカイン染色)ELISPOTアッセイはフローサイトメトリーを使用した細胞内サイトカイン染色(intracellular cytokine staining:ICS)よりも桁違いに高感度です。ICSでは細胞内にサイトカインを留めて検出する必要があり、そのための処理でダメージを受けた細胞を使用して行われます。したがって、ICSで検出されるサイトカインは必ずしも生理活性に関連があるわけではありません。
CTLが提供するELISPOTアッセイプラットフォームであるImmunoSpotアッセイでは、PBMCを使用して0.0001%という低い頻度で抗原特異的T細胞を検出できます。つまり、100万個の近傍に存在するバイスタンダー細胞から単一のサイトカイン分泌T細胞を検出可能です。
ImmunoSpotキットには96ウェルPVDFプレートにサイトカイン特異的キャプチャー抗体(例えばanti-IFNγ)が既にコーティングされたプレコートキットとユーザー自身で抗体をコートするキットがあります。PBMC(または抗原提示細胞を含む単離T細胞)は、事前にコーティングされたウェルに添加され、抗原と共に培養されます。ネガティブコントロールウェルには、無関係の抗原または培地のみを添加します。ポジティブコントロールとして、CD8細胞を刺激するCEFペプチドやCD4細胞を活性化する不活化CMVウイルス、両T細胞サブセットを刺激するためのPHAを抗原として添加します。
ELISPOTアッセイで最良の結果を得るためには、サイトカイン(またはほかの分泌物)産生に必要な期間、細胞と抗原を培養する必要があります。最適な培養時間はサイトカインの種類によって異なり、例えばIFN-γ分泌には24時間が最適です。活性化培養の後、細胞はプレートから除去され、さらなる特性評価などのために再利用することが可能です。次にサイトカイン特異的検出抗体を添加し、プレートに結合した検出抗体を酵素反応または蛍光で可視化します。ImmunoSpotアッセイは単一細胞の分泌活性のフットプリントを色素の「スポット」で検出および最適化できるように最適化されています。したがってスポット数は、培養した細胞中の抗原特異的T細胞の正確な頻度を示しています。さらにスポットサイズと形態は、細胞の分泌活性の大きさと動態に関する追加情報を提供します。
![]() ヒト・サル/SCE |
![]() マウス/SCE |
|||||
---|---|---|---|---|---|---|
ヒト/Human | カニクイザル/Cynomolgus | アカゲザル/Rhesus | マウス/Mouse | ラット/Rat | ブタ/Pig | |
IFN-γ | ||||||
IL-2 | ||||||
IL-4 | ||||||
IL-5 | ||||||
IL-6 | ||||||
IL-10 | ||||||
IL-12 | ||||||
IL-13 | ||||||
IL-17 | ||||||
IL-21 | ||||||
IL-22 | ||||||
TNF-α | ||||||
Granzyme B | ||||||
Perforin | ||||||
GM-CSF |
![]() ヒト・サル/SCF |
![]() マウス/SCF |
|||||
---|---|---|---|---|---|---|
T細胞蛍光シングルカラー | ヒト/Human | カニクイザル/Cynomolgus | アカゲザル/Rhesus | マウス/Mouse | ラット/Rat | ブタ/Pig |
IFN-γ | ||||||
IL-2 | ||||||
IL-4 | ||||||
IL-5 | ||||||
IL-6 | ||||||
IL-10 | ||||||
IL-12 | ||||||
IL-13 | ||||||
IL-17 | ||||||
IL-21 | ||||||
IL-22 | ||||||
TMF-α | ||||||
Granzyme B | ||||||
Perforin | ||||||
GM-CSF |
構成品 | 内容 | 内容量 |
---|---|---|
PVDFメンブレンプレート | 96wellホワイトプレートまたは8wellストリッププレート | 2枚、5枚、10枚のいずれか |
CTL TEST Medium | 無血清培地 | 100mL/2枚入り、100mL×2本/5枚入り、500mL/10枚入り |
キャプチャー抗体 | プレコートプレートの場合は添付無し | キット内容による |
検出用抗体 | ビオチンまたはFITCラベル抗体 | キット内容による |
標識済みターシャリー | ストレプトアビジン-AP、抗FITC抗体-HRP、蛍光標識ストレプトアビジン、蛍光標識抗FITC抗体のいずれか | キット内容による |
発色基質 | CTL-TrueBlue、CTL-TrueRed、BCIPより選択可(発色キットのみ) | キット内容による |
基質希釈液 | 発色キットのみ添付 | キット内容による |
プロトコール |
製品群 | 毒劇 | 化管法 (第1種指定) |
化管法 (第2種指定) |
労働安全衛生法 | 日本語SDS |
---|---|---|---|---|---|
【非プレコート-human】 T cell 発色シングルカラー Kit |
該当/毒 チメロサール |
- | - | 該当 メタノール |
|
【非プレコート-human以外】 【プレコート-全種】 T cell 発色シングルカラー Kit |
- | - | - | 該当 メタノール |
|
【非プレコート-human】 T cell 蛍光シングルカラー Kit |
該当/毒 (チメロサール) |
- | - | - | |
【非プレコート-human以外】 【プレコート-全種】 T cell 蛍光シングルカラー Kit |
- | - | - | - | - |
![]() |
![]() |
![]() |
|
---|---|---|---|
![]() |
![]() |
![]() |