マルチプレックスELISPOT / Fluorospot Kit Multiplex ELISPOT / Fluorospot Kit

CTL社は2カラー、3カラー、そして市場で初めてとなる4カラーFluoroSpotキットをリリースしています。T細胞ELISPOTのマルチプレックス解析は単に細胞の利用を効率化するだけでなく、複数のサイトカインを放出している多機能なT細胞の検出を可能にします。

また、B細胞ELISPOTでは、in vivoで免疫化/活性化された抗体分泌細胞、またはin vitroでポリクローナル刺激されて抗体を分泌したメモリーB細胞からのヒトIgG、IgM、IgA、IgEといったアイソタイプの分泌を区別し確実に検出します。

さらにCTL社では、PBMC集団のT細胞サイトカイン分泌とB細胞抗体分泌の同時モニタリングを実現する3カラーサイトカイン/抗体 FluoroSpotキットもご用意しています。

ELISPOTアッセイの概要と原理はこちらからご覧ください。

CTL社のELISPOT、FluoroSpotキットをご購入いただいたお客様で、アナライザーがご利用いただけない場合に、弊社でプレートをスキャンし結果をお返しする解析受託サービスをご提供しております。


各製品の詳細は下の画像のリンクをクリックしてください。

             
ターゲット
/検出用アナライザー T細胞(サイトカイン)B細胞(抗体) T細胞とB細胞
発色検出モデル
蛍光検出モデル
蛍光検出モデル

マルチプレックス化の最初の一歩: 発色ダブルカラーキット

CTL社はT細胞アッセイのマルチプレックス化を2色検出の酵素標識ELISPOTキットから行えるように用意しており、ポリファンクショナルな細胞を確実かつ正確に計数できます。ELISPOTは100万個のバイスタンダー細胞中の1個の放出細胞を検出できることが知られています。ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ブタ用の全てのImmunoSpotキットは、鋭敏な感度閾値に適合するよう品質管理されています。
また、発色ダブルカラーキットにはCTL-TrueBlue™とCTL-TrueRed™の2つの基質が付属しており、色素のRGBカラースペクトルが十分に離れ、NBT発色のように青色が紫色になることがありません。このために蛍光を使用することなく、発色のダブルカラーアッセイで、マルチファンクショナル細胞をそれ以外と明確に区別できるためコストを抑えられます。

T cell ELISPOT 発色ダブルカラーキット一覧

製品名、型番からお探しの場合はT細胞キットトータル価格表をご覧ください。
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価格表
ヒト・サル/DCE
価格表
マウス/DCE
T細胞2color発色 ヒト/Human カニクイザル
/Cynomolgus
アカゲザル
/Rhesus
マウス/Mouse
IFN-γ/IL-2
IFN-γ/IL-4
IFN-γ/IL-5
IFN-γ/IL-6
-
IFN-γ/IL-10
IFN-γ/IL-12
-
IFN-γ/IL-13
-
IFN-γ/IL-17
IFN-γ/IL-21
×
×
-
IFN-γ/IL-22
×
×
-
IFN-γ/TNF-α
IFN-γ/GzB
×
×
-
IL-10/IL-12
-
IL-10/IL-17
-
IFN-γ/Perforin
-
GzB/Perforin
×
×
-
GzB/IL-2
×
×
-
GzB/TNF-α
×
×
-
TNF-α/IL-2
TNF-α/Perforin
-
IFN-γ/GM-CSF
-
カニクイザル、アカゲザルはヒト用キットとの交差性を確認したものです。〇:Good、△:Medium、×:Poor

キット構成
◆ PVDFメンブレンプレート
CTL TEST Medium
◆ キャプチャー抗体
◆ 検出用抗体(ビオチンラベル、FITCラベル)
◆ 抗体希釈液
◆ 標識済みターシャリー (ストレプトアビジン-AP、抗FITC 抗体-HRP)
◆ 発色基質(CTL-Blue、CTL-Red)
◆ 基質希釈液
◆ Anti-CD28抗体(0.1mg/mL)※一部のキットのみ

B cell ELISPOT 発色ダブルカラーキット一覧


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価格表
ヒト・サル/DCE
価格表
マウス/DCE
B細胞2color発色 ヒト/Human カニクイザル
/Cynomolgus
アカゲザル
/Rhesus
マウス/Mouse
IgA/IgG
-
IgM/IgG
-
IgE/IgG
-
-
-
IgA/IgE
-
-
-
IgA/IgM
-
IgE/IgG4
-
-
-
IgG1/IgG2a
-
-
-
IgG1/IgG2b
-
-
-
IgG1/IgG3
-
-
-
IgG2a/IgG2b
-
-
-
IgG2a/IgG3
-
-
-
IgG2b/IgG3
-
-
-
カニクイザル、アカゲザルはヒト用キットとの交差性を確認したものです。〇:Good、△:Medium、×:Poor

キット構成
◆ PVDFメンブレンプレート
CTL TEST B Medium
◆ Igキャプチャー抗体
◆ 検出用抗体(ビオチンラベル、FITCラベル)
◆ 抗体希釈液
◆ 標識済みターシャリー (ストレプトアビジン-AP、抗FITC 抗体-HRP)
◆ 発色基質(CTL-Blue、CTL-Red)
◆ 基質希釈液

蛍光マルチカラーFluorospot

上の図:4-color T cell Fluorospot(IFN-γ, IL-2, TNF-α, Granzyme B)の同時検出

FluoroSpotアッセイの利点

包括的な免疫モニタリング

FluoroSpotアッセイの最も大きな利点は、複数の異なるサイトカイン(またはB細胞の分泌された免疫グロブリンクラスとサブクラス)を同じアッセイで同時に検出できることです。 ELISPOTで使用される酵素/発色基質システムでは、メソッドの制限により、アナライトの数が最大2つに制限されます。2、3、4色のFluoroSpotは研究者にとって多くの利点がある従来のELISPOTアッセイ手法の精度と感度を維持します。

FluoroSpotアッセイは、活性化T細胞によって分泌されるさまざまなサイトカインおよびエフェクター分子を測定し、T細胞免疫のエフェクター系統に関する貴重な情報を提供します。例えば、最近関心が高まっている分野は、多機能性T細胞の研究です。これは、複数の異なるサイトカインを分泌することが示されている細胞です。

CD8+細胞研究に対するマルチカラーFluoroSpotの有用性

2つ以上のサイトカインを分泌する多機能性CD8+T細胞は、より高いレベルの防御免疫を付与することが示唆されており、一方で単一のサイトカインを分泌するCD8+T細胞は、ウイルスの除去やウイルスの再攻撃に対する防御を提供するのに必ずしも効果的ではありません。多機能性T細胞が分泌する多量のIFN-g / IL-2はウイルス感染への防御と相関しますが、どちらかのサイトカインのみを分泌する細胞は感染への防御と相関しませんでした。
したがって、ウイルス感染の進行を制御する能力は、免疫応答の品質、すなわちウイルスに対するCD8+T細胞応答の機能性と強く相関しています。

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IFN-γ、IL-2、TNF-α、MIP-1βといったサイトカインのプロデューサーが共発現しているT細胞の比率が高いことは、ウイルスの除去や疾患の非進行と強く相関します。これらの相互に関連する複雑な共発現パターンは、現在進行中の集中的な研究の主題であり、FluoroSpotアッセイはそのような多機能性T細胞の研究に最適です。 FluoroSpotアッセイは、単一のアッセイウェルで多機能T細胞と単一サイトカイン産生細胞の相対数を検出およびカウントできます。個々に重複しない波長の蛍光ラベルを使用することで、個々のサイトカインと共分泌サイトカインを簡単に区別できます。

CD4+細胞研究に対するマルチカラーFluoroSpotの有用性

FluoroSpotアッセイは、PBMCまたは分離または濃縮されたCD4+T細胞集団内の異なるタイプのヘルパーT細胞を検出しカウントするための効果的な方法です。デュアルカラーFluoroSpotアッセイは、1回のアッセイでTh1型細胞とTh2型細胞を区別するための簡単で迅速な手段を研究者に提供することもできます。例えば、IFN- / IL-4 FluoroSpotはTh1細胞とTh2細胞を区別できます。同様に、Th1対Th17、またはTh1対Treg細胞集団を視覚化して、各タイプの頻度を決定することができます。

B cell FluoroSpotの有用性

FluoroSpotアッセイの別の有用な用途は、同じアッセイウェル内で異なる免疫グロブリン(Ig)クラスとIgGサブクラスを分泌する抗体分泌細胞のポピュレーションを決定することです。 ここでは、さまざまなIgクラスやサブクラスの頻度を解析することができます。

T cell Fluorospotダブルカラーキット一覧


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2020/10/8 IL-4/IL-5 kit新規追加しました。

                                                                                    
価格表
ヒト・サル/DCF
価格表
マウス/DCF
T細胞2color蛍光 ヒト/Human カニクイザル
/Cynomolgus
アカゲザル
/Rhesus
マウス/Mouse
IFN-γ/IL-2
IFN-γ/IL-4
IFN-γ/IL-5
IFN-γ/IL-6
-
IFN-γ/IL-10
IFN-γ/IL-12
-
IFN-γ/IL-13
-
IFN-γ/IL-17
IFN-γ/IL-21
×
×
-
IFN-γ/IL-22
×
×
-
IFN-γ/TNF-α
IFN-γ/GzB
×
×
-
New! IL-5/IL-4
-
IL-5/IL-17
-
IL-10/IL-12
-
IL-10/IL-17
-
IFN-γ/Perforin
-
GzB/Perforin
×
×
-
GzB/IL-2
×
×
-
GzB/TNF-α
×
×
-
TNF-α/IL-2
TNF-α/Perforin
-
IFN-γ/GM-CSF
-
カニクイザル、アカゲザルはヒト用キットとの交差性を確認したものです。〇:Good、△:Medium、×:Poor

grade2 CMV抗原とCD28抗体で刺激後24時間培養したヒトPBMC(250,000 cells/well)のFluorospotデータ

T cell Fluorospot 3-color キット一覧


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価格表
ヒト・サル/TCF
価格表
マウス/TCF
T細胞3color蛍光 ヒト/Human カニクイザル
/Cynomolgus
アカゲザル
/Rhesus
マウス/Mouse
IFN-γ/IL-2/GzB
×
×
-
IFN-γ/TNF-α/IL-2
IFN-γ/IL-2/IL-21
×
×
-
New!
IFN-γ/IL-2/IL-5
-
New!
IFN-γ/TNF-α/IL-5
-
IFN-γ/TNF-α/IL-6
-
IFN-γ/TNF-α/IL-10
IFN-γ/TNF-α/IL-17
IFN-γ/TNF-α/GzB
×
×
-
IFN-γ/IL-4/IL-10
-
IFN-γ/IL-4/IL-17
-
-
-
IFN-γ/IL-5/IL-10
-
IFN-γ/IL-5/IL-17
-
IFN-γ/IL-6/IL-10
-
IFN-γ/IL-10/IL-12
-
IFN-γ/IL-10/IL-17
-
IFN-γ/TNF-α/Perforin
-
IFN-γ/GzB/Perforin
×
×
-
IFN-γ/GzB/IL-5
×
×
-
IFN-γ/GzB/IL-10
×
×
-
IFN-γ/GzB/IL-17
×
×
-
IFN-γ/IL-2/Perforin
-
IL-10/TNF-α/IL-5
-
IL-10/TNF-α/IL-17
-
カニクイザル、アカゲザルはヒト用キットとの交差性を確認したものです。〇:Good、△:Medium、×:Poor

CEF peptide poolで刺激後24時間培養したヒトPBMC(200,000 cells/well)のFluorospotデータ

T cell Fluorospot 4-color キット一覧


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価格表
ヒト・サル/QCF
T細胞4color蛍光 ヒト/Human カニクイザル
/Cynomolgus
アカゲザル
/Rhesus
IFN-γ/IL-2/IL-5/GzB
×
×
IFN-γ/IL-2/TNF-α/GzB
×
×
IFN-γ/IL-2/IL-5/IL-17
IFN-γ/IL-2/TNF-α/Perforin
IFN-γ/IL-2/GzB/Perforin
×
×
カニクイザル、アカゲザルはヒト用キットとの交差性を確認したものです。〇:Good、△:Medium、×:Poor

PHAで刺激後一晩培養したヒトPBMC(250,000 cells/well)のFluorospotデータ

マルチカラー T細胞Fluorospotキットの構成

Capture kitとDetectio Kitのセットでご購入下さい。

Capture Kit
◆キャプチャー抗体各種
◆抗体希釈液
CTL-TEST Medium
◆ 96-wel 低自家蛍光PVDFフィルタープレート
◆ Anti-CD28抗体(0.1mg/mL)※一部のキットのみ

Detection Kit(検出するサイトカイン毎に必要です)
2color Kitは①と③、3color Kitは①②③、4color kitは①②③④の組み合わせです。

◆FITCラベル抗体
◆Anti-FITC AlexaFluor®488

◆Hapten2ラベル抗体
◆Anti-Hapten2 CTL-Yellow™

◆Hapten3ラベル抗体
◆Anti-Hapten3 CTL-Red™

◆ビオチンラベル抗体
◆ストレプトアビジン eFluor®450

B cell Fluorospotダブルカラーキット一覧


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価格表
ヒト・サル/DCF
価格表
マウス/DCF
B細胞2color蛍光 ヒト/Human カニクイザル
/Cynomolgus
アカゲザル
/Rhesus
マウス/Mouse
IgM/IgG
-
IgG/IgA
-
IgM/IgA
-
IgM/IgG1
-
-
-
IgM/IgG3
-
-
-
IgG1/IgG3
-
-
-
IgG3/IgG4
-
-
-
IgE/IgG4
-
-
-
IgG1/IgG2a
-
-
-
IgG1/IgG2b
-
-
-
IgG1/Ig3
-
-
-
IgG2a/IgG2b
-
-
-
IgG2a/IgG3
-
-
-
IgG2b/IgG3
-
-
-
カニクイザル、アカゲザルはヒト用キットとの交差性を確認したものです。〇:Good、△:Medium、×:Poor

B cell Fluorospot 3-colorキット一覧


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価格表
ヒト・サル/TCF
価格表
マウス/TCF
B細胞3color蛍光 ヒト/Human カニクイザル
/Cynomolgus
アカゲザル
/Rhesus
マウス/Mouse
IgM/IgG/IgA
-
-
IgA/IgG1/IgG3
-
-
-
IgG1/IgG2/IgG3
-
-
-
IgG1/IgG2a/IgG3
-
-
-
IgG1/IgG2b/IgG3
-
-
-
カニクイザル、アカゲザルはヒト用キットとの交差性を確認したものです。〇:Good、△:Medium、×:Poor

B cell Fluorospot 4-colorキット一覧


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価格表
ヒト・サル/QCF
B細胞 4color 蛍光 ヒト/Human
IgM/IgG/IgA/IgE
IgM/IgA/IgG1/IgG3

マルチカラー B細胞Fluorospotキットの構成

Capture kitとDetectio Kitのセットでご購入下さい。

Capture Kit
◆Igキャプチャー抗体
◆抗体希釈液
CTL-TEST B Medium
◆ B-Poly-S™
◆ 96-wel 低自家蛍光PVDFフィルタープレート

Detection Kit(検出するIg毎に必要です)
2color Kitは①と③、3color Kitは①②③、4color kitは①②③④の組み合わせです。

◆FITCラベル抗体
◆Anti-FITC AlexaFluor®488

◆Hapten2ラベル抗体
◆Anti-Hapten2 CTL-Yellow™

◆Hapten3ラベル抗体
◆Anti-Hapten3 CTL-Red™

◆ビオチンラベル抗体
◆ストレプトアビジン eFluor®450

サイトカイン/抗体Fluorospot 3-colorキット一覧


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価格表
サイトカイン/抗体TCF
サイトカイン/抗体 3color 蛍光 ヒト/Human カニクイザル
/Cynomolgus
アカゲザル
/Rhesus
IFN-γ/IgG/IgA
IFN-γ/IgG/IgM
GzB/IgG/IgA
×
×
GzB/IgG/IgM
×
×
TNF-α/IgG/IgA
TNF-α/IgG/IgM
IL-6/IgG/IgA
IL-6/IgG/IgM
IL-10/IgG/IgA
IL-10/IgG/IgM
カニクイザル、アカゲザルはヒト用キットとの交差性を確認したものです。〇:Good、△:Medium、×:Poor

ヒトPBMC(200,000 cells/well)をB-Poly-Sで96時間前刺激を与え、CEF peptide poolを添加しさらに一晩培養したFluorospotデータ

サイトカイン/抗体Fluorospot 3-colorキットの構成

Capture kitとDetectio Kitのセットでご購入下さい。

Capture Kit
◆Igキャプチャー抗体
◆サイトカインキャプチャー抗体
◆抗体希釈液
CTL-TEST Medium
◆ B-Poly-S™
◆ 96-wel 低自家蛍光PVDFフィルタープレート

Detection Kit(検出するアナライト毎に必要です)

◆ビオチンラベル抗体
◆ストレプトアビジン eFluor®450

◆Hapten2ラベル抗体
◆Anti-Hapten2 CTL-Red™

◆Hapten1ラベル抗体
◆Anti-Hapten1 CTL-Yellow™

法規制等

                    
製品群  毒劇  化管法
(第1種指定)
化管法
(第2種指定)
労働安全衛生法 日本語SDS
クリックすると
SDSファイルへ移動します
【human】
T cell発色-ダブルカラー Kit
該当/毒
チメロサール
該当
ジメチルホルムアミド
- 該当
メタノール
ジメチルホルムアミド
過酸化水素



【human以外】
T cell 発色ダブルカラー Kit
- 該当
ジメチルホルムアミド
- 該当
メタノール
ジメチルホルムアミド
過酸化水素


【非プレコート-human】
T cell 蛍光
ダブル-3 color-4 color
該当/毒
(チメロサール)
- - - -
【非プレコート-human以外】
【プレコート-全種】
T cell 蛍光
ダブル-3 color-4 color
- - - - -
B cell 発色
ダブルカラー Kit
- 該当
ジメチルホルムアミド
- 該当
メタノール
ジメチルホルムアミド
過酸化水素


B cell 蛍光
ダブル-3 color-4 color
- - - - -

型番からプレーコートの有無や動物種を知る方法については、FAQsをご覧ください。
CTL社 ImmunoSpot Kitはすべてカルタヘナ非該当です。

関連製品

ELISPOT解析受託サービス
T細胞ELISPOTキット
B細胞ELISPOTキット
ELISPOTアナライザー
ヒト末梢血単核球(PBMC)
抗原とポジティブコントロール
C.T.L社無血清培地と各種試薬

アプリケーションノート