1983年にセシル・チェルキンスキーによって免疫グロブリン分泌B細胞を検出するために開発されたELISPOT技術は、単一クラスの免疫グロブリンをモニターするための非常に感度の高いツールです。
免疫グロブリン(Ig)分泌B細胞の分類単独でのIg 分泌*1 | ポリクローナル性刺激下におけるIg分泌*2 | |
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抗原特異性が不明 | In vivo ISC | In vitro ISC |
抗原特異性が特定されている | In vivo ASC | In vitro ASC |
リンパ芽球腫/プラズマ芽球の状態で循環しているB細胞は、In vivoで抗原に遭遇後5-10日経過したときのみ、抗体を分泌できます。このような、In vivoで活性化された抗体分泌細胞は、プレートに播種してB cell ELISPOTとして測定することができます。
in vitro ISC/ASC休止期のメモリーB細胞は、事前にin vitroの系でmitogenを使ってポリクローナルな刺激を与えることで抗体分泌をB cell ELISPOTとして検出できるようになります。CTL社B細胞ELISPOT kitに含まれるB-Poly-S™試薬は、ヒトB細胞に最適なポリクローナル刺激を与えます。
トータルIg検出/抗原特異的検出(ISC/ASC)本キットでは、キャプチャー抗体としてIg特異的抗体が添付されており、プレート底のメンブレンに固定されます。B細胞が放出する抗体は、クラス、サブクラス、もしくは抗原特異性とは無関係にこのキャプチャー抗体によって結合されます。一方で抗原特異的なIg産生細胞の検出(In vivo/vitro ASC)には、メンブレンをIg Capture Antibodyではなく、抗原そのものでコーティングします。本メソッドの活用によって、In vivo/vitro ASCから放出された抗原特異的な抗体のみが、メンブレンと結合した抗原と結合します。このような抗原と結合した状態の抗原特異的な抗体は、In vivo/vitro ISCと同じ手順で検出できます。抗原のコーティング条件は、それぞれの抗原によって最適化してやる必要があります。CTL社では、様々な抗原をコーティングする際の最適なコンディションについて、サポートする体制を整えています。詳しくはお問い合わせください。
マルチプレックスの利点また、シングルターゲットアッセイでは、複数のIgクラス/サブクラスの包括的な研究が難しくなり、追加の細胞材料、抗原、および労力が必要になります。 デュアルカラーB細胞FluoroSpotアッセイが利用可能になったため、IgクラスまたはIgGサブクラスの異なる組み合わせの検出を同時に促進することで、抗原刺激に対するB細胞応答の機能性に関する適切な洞察を得る能力が大幅に拡大しました。
![]() ヒト・サル/SCE |
![]() マウス/SCE |
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ヒト/Human | ヒト以外の霊長類/NHP | マウス/Mouse | ブタ/Pig | |
IgG | ||||
IgA | ||||
IgM | ||||
IgE | ||||
IgG1 | ||||
IgG2 | ||||
IgG3 | ||||
IgG4 | ||||
IgG2a | ||||
IgG2b | ||||
IgG3 |
CTL Human B-Poly-S™とCTL Mouse B-Poly-S™はどちらも、Resiquimodとそれぞれ組換えHuman IL-2または組換えMouse IL-2を含むストック溶液で、メモリーB細胞のポリクローナル刺激に使用されます。
CTL Human B-Poly-SE™は、IgE分泌メモリーB細胞を生成するために使用される組換えHuman IL-4および抗CD40を含むストック溶液です。
内容量CTL B-Poly-S™ 1本には4,000,000 cells/mLの細胞を320,000,000 cells刺激するために十分な量が入っています。
製品濃度CTL B-Poly-S™ (Human and Mouse) — 1,000x
使用例:10μl B-poly-Sを10ml CTL-TEST B Mediumで希釈CTL B-Poly-S™ (IgE) — 200x
製品名 | カタログ番号 | 希望小売価格 (税別) |
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CTL Human B-Poly-S 80μl (Stimulation for IgM, IgG, IgA) | CTL-hBPOLYS-200 | ¥17,000 |
CTL Human B-Poly-S 80μl (Stimulation for IgE) | CTL-hBPOLYSE-200 | ¥17,000 |
CTL Mouse B-Poly-S 80μl | CTL-mBPOLYS-200 | ¥17,000 |
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製品群 | 毒劇 | 化管法 (第1種指定) |
化管法 (第2種指定) |
労働安全衛生法 | 日本語SDS |
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B cell 発色 Kit | - | - | - | 該当 メタノール |
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CTL-hBPOLYS-200 CTL-hBPOLYSE-200 CTL-mBPOLYS-200 |
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