特徴

Optima PROスクリーンは、バッチモードでのハイスループットタンパク質精製用に設計された24および96ウェルプレートです。培養液の前処理不要で、直接Oprima PRO Screenの各ウエルにロードし、目的タンパク質を精製できる画期的な製品です。自動化にも簡単に対応し、バイオロジクス精製プロセス開発、スクリーニングを飛躍的に加速します。

HEK/CHO細胞、Sf9/Hi5細胞などの培養液を直接ウエルにロードできます。

◆ 通常で1.5×10⁷cells/mlの懸濁液、最大5.0×10⁷cell/mlまでの細胞懸濁液が直接ロードできます。
◆ 各ウエルにProtein Ark社のsuperレジンまたはFast backレジンが乾燥状態で封入されており、サンプルをロードすることで膨潤します。サンプルロード前のレジン平衡化作業が不要です。
◆ レジンの上に珪藻土（DE）フィルターも入っており、細胞、細胞残渣はここで除去され詰まりを防ぎ、タンパク質のみレジンに到達します。（96-wellのみ）
◆ 乾燥ゲルのため、シールすることで部分的な使用も可能です。
◆ DEフィルター無しの製品のご用意もございます。DEフィルター無し製品の場合、ロードできる細胞濃度の上限が低くなります。

Optima PRO Screen製品ラインナップ

　　　　 　　　 　　　 　　　　 　　　　 　　　　　 　　　　　 　　 　　　　　

充填されているレジン	用途	96-well	24-well
Fastback Ni-Advance resin	Hisタグ標識タンパク質精製	〇	〇
Fastback Protein A resin	抗体精製	〇	〇
Fastback Q-IEX resin	陰イオン交換体	〇	-
Super Heparin resin	核酸結合タンパク質、細胞外マトリックスタンパク質の精製	〇	-
Empty plate（レジン無し）	任意のレジンを使用し精製	〇	-
カスタム	指定のレジンを充填しご提供します ⇒カスタムカラムパッキング	〇	〇

ウエル底面からの漏れのない構造

◆ Protein Ark社のSelf Sealメンブレンは、インキュベーション中にウエル底面から試料の漏れを防ぎます。そのためウエル間の試料クロストークが無く、ウエル間のばらつきは非常に低く、プレート間の再現性は非常に高くなっています。

自動化に簡単に対応

◆ サンプルのフィルトレーション、レジンの平衡化不要で作業時間と工程数が少なくなり、分注機を利用した自動化に対応できます。
◆ 目的タンパク質の回収は遠心、吸引、加圧の3つの方法に対応しており、ワークステーションを利用した完全自動化も実現します。

ALL-in-Oneパッケージ

◆ キットはOptimaPRO-D Screenプレートに加え、遠心/吸引/加圧時の廃液回収用プレート、精製サンプル回収プレートのほかに、部分使用のためのプレートシール、最終精製物確認用のウエスタンブロット用メンブレンが含まれており、バッファー類の準備だけでご利用いただけます。

アプリケーションワークフロー

Optima PRO 96 well

Optima Pro 24 well

アプリケーション例

(96-well) 1. OptimaPRO-D Ni-Advance ScreenによるHEK細胞培養液からのHis標識ULPの精製

◆ (左)OptimaPRO Ni-Advance Screen からのWash buffer溶出液とElusion buffer溶出液のSDS-PAGEでの確認。
◆ 1mg ULPをスパイクした各細胞濃度のHEK Expi 293細胞培養液（細胞生存率75%）600μlを、前処理なく直接OptimaPRO-D Ni-Advance Screenにロードしました。5.0×10⁷cells/mlの濃度でも詰まりなく処理可能で、タンパク質回収量の低下も見られません。
◆ 回収率は、スパイクしたULP1mgを100%としたときの、各試料からのULP回収率です。
◆ HEK Expi293表記のデータは、DEフィルター無しのOptima PRO Screenプレート使用の結果です。

　

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(96-well) 2. OptimaPRO-D Ni-Advanceを利用したSf9細胞からのHis標識ULPの精製

◆ (左)SDS-PAGEで確認した3ウエル分の試料中のULPの純度、目的タンパク量に差はなく、ウエル間のばらつきなく精製できています。
◆ 1mg ULPをスパイクした各細胞濃度の懸濁液（細胞生存率96%）600μlを直接Optima PRO-D Ni-Advance Screen（Sf9+DE）にロードしています。2.5×10⁷cells/mlの濃度でも詰まりなく処理可能で、タンパク質回収量の低下も見られません。
◆ 回収率は、スパイクした1mg ULPを100%としたときの、各試料からのULP回収率です 。
◆ Sf9表記のデータは、DEフィルター無しのOptima PRO Screenプレート使用の結果です。

(96-well) 3. Optima PRO-D Protein A を利用したCHO細胞培養液からのモノクローナル抗体（リツキシマブ）の回収

◆ 0.75mgリツキシマブをスパイクしたCHO細胞懸濁液600μlを、1～４の細胞濃度でOptima PRO-D Protein A Screenに直接ロードしています。
◆ インキュベーション後、遠心方式でWash buffer、Elution bufferを通過させ、各ウエルの溶出液をSDS-PAGEで分析しました。サンプルローディングから溶出液の回収までにかかった時間は25分です。
◆ 15×106 cells/mlの細胞濃度でもレジンが詰まらずに抗体が回収できています。

(24-well) マウスハイブリドーマ抗体の精製

DEフィルターの有無によって精製抗体の純度や収量に大きな影響はありません。

Optima PRO (DEフィルターなし）

（右図：精製収量）
【条件】
◆ 1 Lから125 mLに濃縮されたマウスハイブリドーマ上清液を使用
◆ 濃縮、清澄化した上清9mlを24ウェルプレートの各ウェル、1mlレジンにロード（合計3ウェル）
◆ 各ウェルにロードした9 ml上清あたり約5-6 mgの抗体が得られました
◆ Positive Pressure方式による精製で、Resolvex A200を使用しました

Optima PRO-D (DEフィルターあり）

（右図：精製収量）
【条件】
◆ 1 Lから125 mLに濃縮されたマウスハイブリドーマ上清液を使用
◆ 15 x 10~6 CHO cells / mlと9 mL濃縮上清の混合物を24ウェルプレートの各ウェル、1mlレジンにロード（合計3ウェル）
◆ 各ウェルにロードした9 ml上清あたり約5-6 mgの抗体が得られました。
◆ Positive Pressure方式による精製で、Resolvex A200を使用しました。

共通仕様

各レジンの仕様についてはこちらをご覧ください。

共通仕様

　　　 　　　

	96-well	24-well
レジン容量	50 μl (DEフィルター部分除く）	0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1, 1.5, 2 ml
DEフィルター※1	有り、無しの製品あり	有りを希望する場合はオプション
ウエル容量（最大）	1.4 ml	8 ml
サンプル量（最大）	1 ml	8 ml (DE有りの場合）、9 ml（DE無しの場合）（推奨　2-7 ml)
サンプル量（最小）	150 μl (DE有りの場合）、50 μl（DE無しの場合）	2 ml
溶出液量（最小）	150 μl (DE有りの場合）、50 μl（DE無しの場合）	500 μl (DE有りの場合）、300 μl（DE無しの場合）
タンパク質吸着容量	～1mg（レジンの種類による）
プレート材質	ポリプロピレン
メンブレン材質	PTFE	PES
2-Dバーコード	対応可
推奨吸引圧力	0.6 bar （最大 0.8 bar）	-
推奨Positive Pressure Profile※2	(DE有りの場合）サンプルローディング時：60% pressure、90秒、washと溶出時：30% pressure、60秒 （DE無しの場合）30% pressure、60秒
推奨遠心ｇ	2,000～3,000 x g	300 x g
振とうスピード（推奨）(2mm円軌道の場合)	800 rpm	400 rpm
振とうスピード（最大）(2mm円軌道の場合)	1,200rpm	400 – 500 rpm
保存温度	冷蔵（２～8℃）

※1 Diatomaceous Earth filter （珪藻土フィルター）
※2 Resolvex A200 Positive Pressure (Tecan)でテスト済み

【Protein A / 24-well】レジン量の選択目安

サンプルに含まれる抗体量	レジン量
2.5 mg/ sample	0.2ml – 0.4ml resin
5 mg/ sample	0.4 ml – 0.6 ml resin
10 mg/ sample	0.6 ml – 1 ml resin
20 mg/ sample	1 ml resin
30 mg/ sample	1 ml - 2 ml resin
40 mg/ sample	2 ml resin

キット構成

Optima Pro 96 well

	包装
コンポーネント	1個入り	2個入り	10個入り
Optima PRO screen	1 pc	2 pc	10 pc
Pressure/vacuum sealing plate	1 pc	2 pc	2 pc
2 ml wash/eluate collection plate	2 pc	4 pc	-
0.35 ml eluate collection plate	1 pc	2 pc	-
Hanging drop blotting membrane	1 pc	4 pc	20 pc
Sealing Mat	1 pc	2 pc	10 pc

Optima Pro 24 well

	包装
コンポーネント	1個入り	2個入り	10個入り
Optima PRO screen	1 pc	2 pc	10 pc
10 ml wash/eluate collection plate	1 pc	2 pc	10 pc
Sealing Mat	1 pc	2 pc	10 pc

価格表

Fastback Ni-Advance resin（Hisタグ標識タンパク質精製）

【96-well】Fastback Ni-Advance resin

※ 品番末尾にD：DEフィルター有り

【24-well】Fastback Ni-Advance resin

Fastback Protein A resin（抗体精製）

【96-well】Fastback Protein A resin（抗体精製）

※ 品番末尾にD：DEフィルター有り

【24-well】Fastback Protein A resin（抗体精製）

Fastback Q-IEX resin（陰イオン交換体：負に帯電したタンパク質の精製）

※ 品番末尾にD：DEフィルター有り

Super Heparin resin（血清タンパク質などの精製）

※ 品番末尾にD：DEフィルター有り

Empty plate（レジン、DEフィルター無し）

Empty plate/96-well

Empty plate/24-well

アクセサリー

法規制（Empty plate以外）

　

製品名, 品番	毒劇	化管法 (第1種指定）	化管法 (第2種指定)	労働安全衛生法	SDS
Optima PRO-D Screen Kit	-	-	-	該当（エタノール）	SDS

プロトコール