エムエステクノシステムズ

Xdrop®

Xdrop全般について

ダブルエマルジョンとは何ですか?

ダブルエマルジョンはドロップレット（液滴）の内側にあるドロップレット（液滴）です。
Xdropでは通常、水-油-水（W/O/W）系を指し、内側の液滴がサンプル（例：単一細胞懸濁液）を含み、油層に囲まれ、さらに外側の水相に懸濁されています。ダブルエマルジョンはいくつかの重要な利点を提供し、単一細胞解析およびスクリーニングに理想的なプラットフォームとなります。その利点は以下の通りです。

ピコリットル規模の液量：これらの液滴は小型バイオリアクターとして機能し、高感度のバイオアッセイ開発を可能にします。ピコリットル規模の液量により反応時間が短縮され、高価な試薬の効率的な利用が実現します。

生体適合性環境：液滴は細胞に優しい微小環境を提供し、様々な生化学反応や生細胞アッセイをサポートします。

フローサイトメトリー互換性：シングルエマルジョンとは異なり、外側水相を叶えるダブルエマルジョンはフローサイトメトリーやセルソーターの互換性を保証します。

Xdropを使用する利点は何ですか？

Xdropは、単一細胞または細胞ペアをドロップレットに封入し、フローサイトメトリーやソーターのワークフローにシームレスに統合することを可能にします。これにより、個々の細胞だけでなく、細胞全体の微小環境を分析できます。主な利点は以下の通りです：

真の単一細胞分離

下流アッセイのための細胞生存率を維持

細胞間の交差汚染を最小化

複数の下流プロセスに対応（例：シーケンシング、PCR、抗体開発）

最小限のサンプル消費

標的濃縮のための蛍光マーカーとの組み合わせが可能

Xdropをフローサイトメトリーおよびソーターと組み合わせる利点は何ですか？

Xdropをフローサイトメトリーと組み合わせることで、細胞を自身の微小環境内で生存・分離した状態を維持しながら、ハイスループットな単一細胞解析が可能になります。
これらを統合することで、高解像度かつハイスループットな単一細胞研究のための強力なプラットフォームを提供し、以下の利点があります：
1. 生細胞解析とソーティング
細胞内マーカーを用いたアッセイとは異なり、Xdropドロップレットは生細胞の解析とソーティングを可能にします。
2. シグナルのクロストークなし
封入により各シグナルがドロップレット内の特定細胞に由来することが保証され、隣接する高発現細胞からの干渉を排除します。
3. 単一細胞ペア解析
エフェクター細胞とターゲット細胞などの定義済み細胞ペアを封入可能です。
4. ハイスループット・単一細胞分解能
1回のランで数百万のドロップレットを分析可能です。
5. 希少事象の標的選別
ドロップレットの蛍光強度を指標として、希少細胞や高機能細胞を濃縮可能です。
6. 細胞微小環境の保存
個々のドロップレットは封入細胞の本来の微小環境を維持し、分析および選別プロセス全体を通じて分泌分子、細胞間相互作用、レポーターシグナルを保持します。
7. 多変量解析
フローサイトメーターは複数の蛍光チャネルを同時に測定可能です。
8. 柔軟な下流応用
分選後、ドロップレットを破砕して細胞や代謝物、核酸などを回収することが可能です。

Xdropのドロップレットについて

Xdropによって作製されるドロップレットの大きさはどれくらいですか？

作製されるドロップレットのサイズは、使用するカートリッジタイプと圧力範囲によって異なります。デフォルト設定でのサイズは次のとおりです：

Xdrop DE20カートリッジ：内径15 µm、外径20 µm。

Xdrop DE50カートリッジ：内径50 µm、外径75 µm。

カートリッジ1個あたり、異なるサンプルを何種類処理できますか？

標準Xdropカートリッジは1～8個の独立したレーンを備えており、複数のサンプルを並列処理することが可能です。

ドロップレット作製にはどのくらい時間がかかりますか？

ドロップレット作製は迅速で、通常レーンあたり数分です。実験の総所要時間はレーン数に依存しません。

Xdrop DE20カートリッジ：40分
Xdrop DE50カートリッジ：5分

ドロップレットのサイズは設定により調整されているのでしょうか？

はい、ウェル圧力を調整することで液滴サイズを変更できます。ただし、最大および最小の液滴サイズはカートリッジのマイクロ流体構造によって制限されます。

カートリッジ1レーンあたり、何個のドロップレットが生成されますか？

Xdropテクノロジーは、使用するカートリッジに応じて、1レーンあたり最大800万個の液滴を生成できます。

Xdrop DE20カートリッジ：1レーンあたり約800万個
Xdrop DE50カートリッジ：1レーンあたり約100万個

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サンプルについて

Xdropに適用可能な細胞腫を教えてください。

Xdropは生細胞封入用に設計されており、様々な種や組織由来の幅広い細胞株および初代細胞で使用されています。

具体的には以下の通りです：
細胞株：CHO、HEK293、Jurkat、NK細胞、CAR-T細胞、ハイブリドーマ細胞
初代細胞：末梢血単核球（PBMC）、プラズマB細胞、脾臓細胞
微生物：大腸菌（E. coli）、酵母

Note：浮遊細胞が一般的に最適ですが、付着細胞はトリプシン処理後に使用可能です。ただし凝集しやすい場合があります。

Xdropカートリッジにロードする細胞はどれくらい必要ですか？

アッセイ内容と標的とする細胞の頻度に依存しますが、通常10万から200万個の細胞が必要です。

必要なサンプル量はどれくらいですか？

Xdrop DE20カートリッジ：40 µLの細胞サンプルが必要です。

Xdrop DE50カートリッジ：100 µLの細胞サンプルが必要です。

Xdropの利用において、適してない細胞培地や試薬はあります？

ほとんどの場合、ご使用の細胞に最適な培養培地を使用できます。ただし、以下の重要な考慮事項があります：

・FBS含有量が低い培地を使用してください（10％未満が推奨）。

・界面活性剤濃度が高い組成は避けてください。ドロップレットの安定性に影響を与える可能性があります。

・アッセイ性能とシグナル検出の向上のため、フェノールレッド非添加の培地が推奨されます。

ドロップレットの培養方法について教えてください。

ドロップレットは、DNA LoBind遠心チューブまたは培養プレートを用いて、標準的な細胞培養インキュベーターで培養できます。

蛍光マーカーはアッセイのどのタイミングで添加しますか？

蛍光マーカーは、生細胞染色の場合、一般にドロップレット生成前に添加します。ドロップレットの透過性と互換性があれば、生成後に添加することも可能です。

細胞染色はいつ行いますか？

染色は通常、カートリッジへの充填前に実施され、ドロップレット形成時にマーカーが存在することを示します。

Xdropドロップレット内で細胞をインキュベートできる期間はどれくらいですか？

細胞の種類やアッセイに応じて、ドロップレット内で数時間から数日間までインキュベート可能です。
一般的なインキュベーション期間中、ドロップレットの安定性と細胞の生存率は維持されます。

解析とソーティング

セルソーターでXdropドロップレットをソートすることは可能ですか？

はい、Xdropドロップレットは、大口径ノズルサイズ（通常100 µm以上）に対応し、分取遅延を手動で調整できる場合、ほとんどのフローサイトメトリー分取システムと互換性があります。

Xdropと互換性のあるフローサイトメーターおよびセルソーターを教えてください。

Xdropの液滴は、以下のメーカーのフローサイトメーターおよびソーターのほとんどの機種と互換性があります：
・Agilent（アジレント・テクノロジー株式会社）
・Sony（ソニー株式会社）
・BD（BD Biosciences）
・Cytek（Cytek Biosciences ）
・Beckman Coulter

ソートを実行する際は、ノズルサイズをご確認ください：

・Xdrop DE20カートリッジ：100 µmノズル
・Xdrop DE50カートリッジ：130 µmノズル

下流のアプリケーション

ワークフローにXdrop技術を導入した場合、どのような下流工程が考えられるでしょうか？

Xdropは様々な下流プロセスと統合可能であり、異なるワークフローやアプリケーションをサポートします：

・増殖およびクローン拡大のための単一細胞培養

・シングルセルRT-PCRによる遺伝子回収：検証用遺伝子（例：IgGやVDJ可変領域）の回収を可能にします。

・シングルセルシーケンスワークフロー：10x Genomicsなどのプラットフォームを用いたRNAシーケンスなど。

・抗体スクリーニング：特に当社のV(D)Jシーケンスプロトコルを用いたもの。

その他FAQ

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