SupreDye Cycle Sequencing Kit

SupreDye

購入したキットに5x Sequencing Bufferと#27396 5x DNA Sequencing Diluentが入っていました。これらは同じものですか?成分に違いがあるのでしょうか?

SupreDye cycle sequencing kit(100回分、1000回分)に含まれている5x Sequencing Bufferと#27396 5x DNA Sequencing Diluentは同等の用途でお使いいただけます。
成分については製造元から開示されておりません。
#27396 5×DNA Sequencing Bufferは、BigDyeなどのサイクルシーケンシングキットの希釈液として20年近い販売実績があり、SupreDye(2020年4月販売開始)に関しましても問題なく希釈していただけます。

SupreDye v3.1 Cycle Sequencing Kit(品番 063002)を購入したところ、パッケージの品番が「063002D」となっていました。違う製品が届いたのでしょうか?

同じ製品です。品番063002 SupreDye v3.1 Cycle Sequencing Kitに、追加の5x Sequencing Bufferを添付しているため、パッケージのラベルが「063002D」となっています。

シークエンスのDyeの希釈ルールを教えて下さい。

SupreDye ready-reaction premixの標準的な反応は、トータル反応液量 20uL で、プレミックス 8 uL を添加します。このため、SupreDye ready-reaction premixは2.5 x濃度であると表現されます。
しかしながら、過剰なシグナルを回避するためや試薬の節約のために、標準量のプレミックスを加えることはお勧めしません。5 x Sequencing Buffer と 2.5x rr premix の組み合わせについて、一般的なルールは以下の通りです。
VB = ((VT/2.5)-VM)/2

VB=反応液中の 5 x Sequencing Buffer 量
VT=トータルのシーケンシング反応液量
VM=反応液中の SupreDye rr premixの量

例① : 20 uL (VT)
・1 uL SupreDye rr Premix (VM)
・3.5 uL 5X Sequencing Buffer (VB)
・1 uL Template
・1 uL primer (5 pMol)
・13.5 uL Water

例② : 20 uL (VT)
・4 uL SupreDye rr Premix (VM)
・2 uL 5X Sequencing Buffer (VB)
・1 uL Template
・1 uL primer (3.2 pMol)
・12 uL Water

詳細はプロトコールにも記載がございます。

保存温度を教えてください。

-20℃です。

PCR産物をシーケンシング反応前に精製する必要がありますが、推奨のキット等はありますか?

カラムタイプの精製では、QuickStep 2 PCR Purification Kit 108 本入り(#92159)、酵素反応による精製では、EnzSAP2 PCR Clean-Up Reagent (500 反応) (#EnzSAP2-500)をお勧めします。

5×Sequencing bufferのみ購入することはできますか?

できます。BigDyeやSupreDyeの希釈に利用できる、5x DNA Sequencing Diluentを販売しております。詳しくは下記リンクをご参照ください。
http://www.mstechno.co.jp/categories/view/23

シーケンシングに使用するテンプレート量が不足するとどうなりますか?

シグナルが弱くなり、シグナルノイズ比が低下する可能性が高くなります。

シーケンシングに使用するテンプレート量が過剰だとどうなりますか?

リード長が短くなります。

シーケンシング反応後の精製方法について推奨のキット等はありますか?

弊社ではカラムタイプのシーケンス反応精製キットを取り扱っております。シングルチューブタイプのGel filtration Cartridge(#42453) の他、96well タイプ、8-strip タイプもございます。
膨潤済みのゲルがカラムに充填されており、パッケージから取り出して僅か数分で精製が可能です。

ABIジェネティックアナライザーで利用する場合、機器設定変更は必要ですか?

すでにBigDyeターミネーターキットをご利用だった場合、設定変更は不要です。SupreDyeTMはフィルターセットEでご利用いただけます。
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