エムエステクノシステムズ｜【ユーザーレビュー】His-tagタンパク質精製レジン＆カラム

【ユーザーレビュー】His-tagタンパク質精製レジン＆カラム

ご協力いただいたユーザー様

お名前：竹下　浩平　様

ご所属：理化学研究所放射光科学研究（SPring-8）センター　生物系ビームライン基盤グループ　

（対象製品）Super Ni-NTA Agarose Resin

◇ His-tagタンパク質精製用ニッケルレジンです。
◇ 市場最高クラスのタンパク質結合能と優れた薬品耐性が特徴です。

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評価ポイント-①ターゲットタンパク質の回収量/ 他社製品との比較

【評価方法】
500 ml 培養の大腸菌を超音波破砕後に超遠心し、上清を回収した。
Super Ni-NTA、他社製Ni-NTAレジンA、Bと上清を混合し、バッチ法により精製した。　
溶出分画のタンパク質濃度(A280)の比較とSDS-PAGE（CBB染色）を行った。

【結果①】回収したタンパク質濃度

溶出分画	E1（1回目の溶出液）(mg/ml)	E2（2回目の溶出液）(mg/ml)
他社製品 A	1.597	2.818
他社製品 B	3.254	2.837
Super Ni-NTA	4.018	5.166

Lane
M: 分子量マーカー, S: 超遠心後の上清, F: 樹脂未吸着分,
W1: 1回目の洗浄液, W2: 2回目の洗浄液,
E1: 1回目の溶出液, E2: 2回目の溶出液

【結論①】

２つの溶出分画どちらにおいても回収量はSuper Ni-NTAが最も優れていた。

評価ポイント-②結合Capacityテスト

【評価方法】
1 mg分のHisTag融合タンパク質とSuper Ni-NTA、他社製品A、Bの3種類の樹脂 100 µlを5分間混合し、結合していない上清のタンパク質濃度を測定した。
Binding Buffer組成：20 mM HepesNa, 350 mM NaCl, 2 mM DTT, 10 mM Imidazole

【結果②】上清に残った未結合のタンパク質濃度

	処理前のタンパク質濃度(mg/ml)	5分後の上清タンパク質濃度(mg/ml)
他社製品 A	1.333	0.202
他社製品 B		0.208
Super Ni-NTA		0.170

【結論②】

結合能についてもSuper Ni-NTAが最も優れていた。

（対象製品）HiFliQNi-NTA columns

Super Ni-NTAレジンが充填された1 mL、5 mLのプレパックカラムです。
標準的なクロマトグラフィーシステムと互換性があります。

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他社製品との比較データ

(クロマトグラム）HiFliQ Ni-NTA column 5 ml、他社製品C、Dのカラムによるクロマトグラム

2 L培養の大腸菌を超音波破砕後に超遠心し、0.45 µmフィルターで濾過した。Hisタグ化タンパク質の精製はAKTA Avant(Cytiva)を使用した。
　・ Wash buffer： 20 mM HEPES-Na (pH 7.0), 350 mM NaCl, 5 mM DTT
　・ Elution buffer：20 mM HEPES-Na (pH 7.0), 350 mM NaCl, 5 mM DTT(50 mM～1 M Imidazole)