NGSライブラリー定量キット BrightBox Quantitation Assay

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BrightBoxは、ライブラリー溶液の希釈作業を低減し、迅速にNGSライブラリーを定量できるキットです。
illumina NGS用ライブラリーの定量にかかる時間を大幅に短縮し、NGSワークフローのスループットがさらに向上します。

概要

BrightBoxアッセイには、以下のアドバンテージがあります。

・他のqPCR利用法と異なり、ライブラリー溶液の2段階希釈が不要
・他キットの2倍以上のスループット(最大26ライブラリー/96ウエルプレート1枚)
・ライブラリー溶液とプレミックス試薬を混合し、qPCR装置で5分インキュベートするだけのスピード測定

96ウエルプレート1枚で26ライブラリーをn=3で定量するアッセイ全体が、15分で完了します。

キット内容

          
反応数 Standard 1~6 Assay Master Mix
100回分
品番# 50100
0nM~30nM, 各20μL 170μL
500回分
品番# 50500
0nM~30nM, 各50uL 850μL

特徴

迅速
  ・アッセイミックス分注後、ライブラリー溶液とDNAスタンダードを分注するだけのセットアップ
  ・qPCR装置利用の反応時間5分で測定し濃度決定
簡便
  ・試薬はすべて冷蔵保存
  ・調製済みReady-to-Useのアッセイミックス
  ・実験操作は室温で対応可能(試薬のon ice不要)
正確
  ・最小のピペッティング操作でエラーの可能性を低減
  ・P5、P7アダプター配列特異的で、シーケンス可能な断片のみを検出
  ・デジタルPCRでQC済みのスタンダード溶液
堅牢
  ・広い濃度ダイナミックレンジと直線性

既存の定量キットとの希釈ステップ数およびスループット比較

従来の定量キットの希釈フロー


(クリックで拡大)

BrightBoxの希釈フロー:ライブラリーの希釈操作が無いシンプルな手順


(クリックで拡大)

性能検証データ

リード数との相関性
13個のライブラリーについて、BrightBoxと一般的なqPCRライブラリ定量キットを用いてMolarity(nM)をそれぞれ算出し、Molarityをx軸、MiSeqのリード数をy軸としてプロットした。BrightBoxで決定した濃度とリード数のプロットには、より高い直線性があった。

再現性
16種類のライブラリーについて、qPCR装置でBrightBoxアッセイを2回繰り返し、高い再現性が得られた。

スタンダード溶液の正確性
BrightBoxキットのスタンダード溶液をqPCRで12回測定した。直線性は高く(R2=0.9989)、ばらつきは少ない結果が得られた。

BrightBoxのアッセイ手順

1.冷蔵庫からアッセイミックスとスタンダードのチューブを取り出します。
2.各ウェルに9μLのアッセイマスターミックス(1.7μLアッセイミックス+7.3μL 水)を分注します。※サンプルの場合はサンプル量に合わせて水の量を調製します。
3.各ウェルに1μLのスタンダードを添加します。※サンプルの場合は1-5μL添加します。
4.qPCR装置で約5分間の加温をします。
5.蛍光強度を読み取ります。
6.スタンダードカーブを取得し、スタンダードカーブからサンプル濃度を算出します。

濃度未知のサンプル調製内訳
Component Volume
Assay Master Mix 1.7μL
Sample 1-5μL
dH2O サンプル量に応じて添加
トータル反応量 10μL

適合性

テスト済みライブラリ
・Nextera XT
・WT RNA-Seq
・PCR-Free WGS
・mRNA-Seq
・10x Single Cell
・ATAC-Seq
・PCR-Free fragment
・2b-RAD
・ddRAD-Seq
・Hi-C
・MNase ChIP
・Best-RAD
・16s-Seq
・RRBS
・DNA Methylation
・ITS-Seq
・RAD-Seq
・NextRAD

対応する検出用装置
・Applied Biosystems QuantStudio 6 Pro, 7 Pro (384 and 96)
・Applied Biosystems QuantStudio 3, 5 (384 and 96)
・Applied Biosystems 7 Flex
・Applied Biosystems Viia7
・Applied Biosystems 7900
・Roche LC480
・Bio-Rad CFX Connect
・Bio-Rad CFX96
・Agilent AriaMX
・Applied Biosystems StepOnePlus
・Qubit 4
・Qubit 3
・Qubit 2.0

価格表

品番 品名 保存条件 容量/入数 希望小売価格(税別)
50100 BrightBox Assay Mix & Controls (100 rxns) 冷蔵 100 rxns 195,000
50500 BrightBox Assay Mix & Controls (500 rxns) 冷蔵 500 rxns 920,000



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プロトコール